Le « Nouveau programme de diagnostic et de traitement de la pneumonie à virus coronarien (essai neuvième édition) » utilise la valeur Ct de détection d'acide nucléique ≥ 35 comme l'une des bases importantes pour la libération de la gestion de l'isolement ou la sortie. Alors, que représente la valeur Ct du kit de détection d’acide nucléique ? Les valeurs Ct des différents kits sont-elles comparables ? Est-ce que plus la valeur Ct est basse, meilleures sont les performances du kit ?
La valeur Ct (Threshold Cycle, Ct) est le nombre de cycles PCR lorsque l'intensité du signal de fluorescence quantitative de fluorescence en temps réel dépasse le seuil défini. Les kits de détection d’acide nucléique prennent comme exemple la nouvelle couronne. Pour la même réaction du même kit visant à détecter deux échantillons contenant le virus, A et B, la taille de la valeur Ct représente, dans une certaine mesure, le nombre de copies du gène viral, c'est-à-dire la charge virale. Plus le Ct de l’échantillon B est faible, plus la charge virale est élevée. La valeur Ct est inversement proportionnelle à la charge virale et à son pouvoir infectieux. Les avantages et les inconvénients des différents kits quantitatifs de fluorescence en temps réel ne peuvent pas être jugés uniquement par la taille de la valeur Ct, car les valeurs Ct des différents kits ne sont pas comparables. L'évaluation des performances du kit doit être mesurée sous les aspects de sensibilité (limite minimale de détection), de spécificité, de précision, de stabilité et d'application diagnostique. Chaque fabricant de réactifs possède ses propres dix-huit types d’arts martiaux, et ils ont leurs propres pouvoirs magiques en application, je n’entrerai donc pas dans les détails ici.
Pour les instruments/systèmes conventionnels d’analyse PCR quantitative en temps réel (QPCR), l’acquisition des valeurs Ct et leur utilisation généralisée dans les applications de détection d’agents pathogènes sont familières à tout le monde. Avec le développement de l’industrie et les progrès de la technologie, les équipements et réactifs QPCR ont rencontré des opportunités et des défis. Yiou Think Tank (Rapport de recherche 2021 sur l'industrie chinoise des tests génétiques : technologie) a analysé que la plupart des entreprises du secteur QPCR de mon pays sont confrontées à des problèmes courants basés sur la technologie. En réponse à ces problèmes, les solutions sont principalement divisées en deux types : accélérer l’amélioration technologique et déployer de nouvelles technologies.
Le POCT pour le diagnostic moléculaire QPCR est l’une des orientations de développement de l’industrie, et l’amélioration des performances est un facteur important pour accélérer l’application de la technologie. Pour les équipements POCT avec débit d'échantillon unique de QPCR, comment optimiser la valeur Ct du paramètre clé d'une réaction unique en R&D ? Le même équipement, le même système réactionnel et la même concentration de matrice, théoriquement, plus la valeur Ct d'une seule réaction est élevée, plus l'efficacité de l'enzyme dans la réaction est faible.
Dans le processus d'amélioration de l'efficacité de la réaction enzymatique et d'optimisation de la valeur Ct, une courbe d'amplification quantitative de fluorescence typique de 40 cycles PCR peut être analysée en premier. La courbe d'amplification dans la figure ci-dessous est divisée en phase de fond de fluorescence, phase d'amplification exponentielle, phase linéaire et phase de plateau. Afin d'obtenir un fond de fluorescence plus faible, dans la mesure du possible pour le distinguer de la valeur de fluorescence d'une amplification exponentielle précoce, il est nécessaire de tester à partir du support des consommables de réaction, du criblage de la conception de la sonde d'amorce et du système de tampon de réaction. La période d’amplification exponentielle est la réaction la plus directe de l’activité enzymatique, et elle est également la preuve de la parfaite coordination des équipements POCT, des supports de réaction et des réactifs. À l’heure actuelle, le contrôle de la température de l’équipement, l’acquisition et l’analyse des signaux optiques, la biocompatibilité des porteurs et les performances du système des réactifs doivent être ajustés et testés sous tous les aspects. Enfin, l’ensemble de l’amplification est terminé et les résultats doivent être présentés par un algorithme de données rigoureux pour obtenir une valeur Ct raisonnable.

Les innombrables étapes du personnel R&D constituent une petite étape dans l'optimisation de la valeur Ct. Dans l’anxiété et l’excitation du jour et de la nuit, chaque fois « les montagnes et les rivières sont introuvables, les saules sont sombres et les fleurs sont lumineuses et il y a un autre village », ce qui nous donne le courage et la passion d’avancer. encore.