Le «nouveau programme de diagnostic et de traitement de la pneumonie coronarienne (Neuème édition)» utilise la valeur CT de détection de l'acide nucléique ≥35 comme une base importante pour la libération de la gestion ou de la décharge de l'isolement. Alors, que représente la valeur CT du kit de détection d'acide nucléique? Les valeurs CT de différents kits sont-elles comparables? Est-ce que plus la valeur CT est inférieure, meilleure est la performance du kit?
La valeur CT (cycle de seuil, CT) est le nombre de cycles de PCR lorsque l'intensité du signal de fluorescence quantitative de fluorescence réelle dépasse le seuil défini. Les kits de détection d'acide nucléique prennent la nouvelle couronne à titre d'exemple. Pour la même réaction du même kit pour détecter deux échantillons contenant deux échantillons, A et B, la taille de la valeur CT représente, dans une certaine mesure, le nombre de copies du gène viral, c'est-à-dire la charge virale. Plus la tomodensitométrie de l'échantillon B est faible, plus la charge virale est élevée. La valeur CT est inversement proportionnelle à la charge virale et à son infectivité. Les avantages et les inconvénients de différents kits quantitatifs de fluorescence réelle ne peuvent pas être jugés uniquement par la taille de la valeur CT, car les valeurs CT de différents kits ne sont pas comparables. L'évaluation des performances du kit doit être mesurée à partir des aspects de la sensibilité (limite de détection minimale), de la spécificité, de la précision, de la stabilité et de l'application de diagnostic. Chaque fabricant de réactifs a ses propres dix-huit types d'arts martiaux, et ils ont leurs propres pouvoirs magiques en application, donc je n'entrerai pas dans les détails ici.
Pour les instruments / systèmes d'analyse de PCR quantitative réelle conventionnels (QPCR), l'acquisition des valeurs CT et leur utilisation généralisée dans les applications de détection des agents pathogènes sont familières à tous. Avec le développement de l'industrie et les progrès de la technologie, l'équipement et les réactifs QPCR ont rencontré des opportunités et des défis. Yiou Think Tank (Rapport de recherche 2021 sur l'industrie des tests génétiques de la Chine: la technologie) a analysé que la plupart des entreprises de l'industrie QPCR de mon pays sont confrontées à des problèmes communs en fonction de la technologie. En réponse à ces problèmes, les solutions sont principalement divisées en deux types: accélérer l'amélioration des technologies et déployer de nouvelles technologies.
Le POCT pour le diagnostic moléculaire qPCR est l'une des directions de développement de l'industrie, et l'amélioration des performances est un facteur important pour accélérer l'application de la technologie. Pour l'équipement POCT avec un seul débit d'échantillon de qPCR, comment optimiser la valeur CT du paramètre clé d'une seule réaction en R&D? Le même équipement, le même système de réaction et la même concentration de matrice, théoriquement plus la valeur CT d'une seule réaction est grande, plus l'efficacité de l'enzyme est faible dans la réaction.
Dans le processus d'amélioration de l'efficacité de la réaction enzymatique et d'optimisation de la valeur CT, une courbe d'amplification quantitative de fluorescence de cycle de PCR typique de 40 PCR peut être analysée en premier. La courbe d'amplification dans la figure ci-dessous est divisée en phase de fond de fluorescence, phase d'amplification exponentielle, phase linéaire et phase de plateau. Afin d'obtenir un fond de fluorescence inférieur, dans la mesure du possible pour le distinguer de la valeur de fluorescence de l'amplification exponentielle précoce, il est nécessaire de tester à partir du porte-consommables de réaction, du dépistage de la conception des sondes d'amorce et du système de tampon de réaction. La période d'amplification exponentielle est la réaction la plus directe de l'activité enzymatique, et c'est aussi la preuve de la coordination parfaite de l'équipement POCT, des porteurs de réaction et des réactifs. À l'heure actuelle, le contrôle de la température de l'équipement, l'acquisition et l'analyse du signal optique, la biocompatibilité des porteurs et les performances du système des réactifs doivent être ajustés et testés dans tous les aspects. Enfin, l'ensemble de l'amplification est terminé et les résultats doivent être présentés par un algorithme de données rigoureux pour obtenir une valeur CT raisonnable.

Une petite étape dans l'optimisation de la valeur CT est les innombrables étapes du personnel R&D. Dans l'anxiété et l'excitation du jour et de la nuit, chaque fois que «les montagnes et les rivières ne sont nulle part, les saules sont sombres et les fleurs sont brillantes et il y a un autre village», ce qui nous donne le courage et la passion pour aller de l'avant.