El "nuevo programa de diagnóstico y tratamiento de neumonía del virus coronario (prueba Novena edición)" utiliza el valor de CT de detección de ácido nucleico ≥35 como una de las bases importantes para la liberación del manejo o el alta de aislamiento. Entonces, ¿qué representa el valor de CT del kit de detección de ácido nucleico? ¿Son comparables los valores de CT de diferentes kits? ¿Cuanto menor sea el valor CT, mejor será el rendimiento del kit?
El valor de CT (ciclo de umbral, CT) es el número de ciclos de PCR cuando la intensidad de la señal de fluorescencia cuantitativa de fluorescencia real de la fluorescencia real excede el umbral establecido. Los kits de detección de ácido nucleico toman la nueva corona como ejemplo. Para la misma reacción del mismo kit para detectar dos virus - que contienen muestras, A y B, el tamaño del valor de CT representa, hasta cierto punto, el número de copias del gen viral, es decir, la carga viral. Cuanto menor sea la TC de la muestra B, mayor es la carga viral. El valor de CT es inversamente proporcional a la carga viral y su infectividad. Los pros y los contras de diferentes kits cuantitativos de fluorescencia de tiempo real no se pueden juzgar únicamente por el tamaño del valor CT, porque los valores de CT de diferentes kits no son comparables. La evaluación del rendimiento del kit debe medirse a partir de los aspectos de la sensibilidad (límite de detección mínimo), especificidad, precisión, estabilidad y aplicación de diagnóstico. Cada fabricante de reactivos tiene sus propios dieciocho tipos de artes marciales, y tienen sus propios poderes mágicos en la aplicación, por lo que no entraré en detalles aquí.
Para los instrumentos/sistemas de análisis de PCR cuantitativos de tiempo real convencionales (QPCR), la adquisición de los valores de CT y su uso generalizado en las aplicaciones de detección de patógenos son familiares para todos. Con el desarrollo de la industria y el avance de la tecnología, los equipos y reactivos QPCR han encontrado oportunidades y desafíos. Yiou Think Tank (Informe de investigación 2021 sobre la industria de pruebas genéticas de China: tecnología) analizó que la mayoría de las empresas en la industria QPCR de mi país enfrentan problemas comunes basados ​​en la tecnología. En respuesta a estos problemas, las soluciones se dividen principalmente en dos tipos: acelerar la mejora de la tecnología e implementar nuevas tecnologías.
POCT para el diagnóstico molecular de QPCR es una de las direcciones de desarrollo de la industria, y la mejora del rendimiento es un factor importante para acelerar la aplicación de la tecnología. Para el equipo POCT con rendimiento de muestra simple de QPCR, ¿cómo optimizar el valor de CT del parámetro clave de una sola reacción en I + D? El mismo equipo, el mismo sistema de reacción y la misma concentración de plantilla, en teoría, cuanto mayor sea el valor de CT de una sola reacción, menor será la eficiencia de la enzima en la reacción.
En el proceso de mejorar la eficiencia de la reacción enzimática y optimizar el valor de CT, primero se puede analizar una curva de amplificación cuantitativa de fluorescencia típica de ciclo PCR. La curva de amplificación en la figura a continuación se divide en fase de fondo de fluorescencia, fase de amplificación exponencial, fase lineal y fase de meseta. Para lograr un fondo de fluorescencia más bajo, en la medida de lo posible para distinguirlo del valor de fluorescencia de la amplificación exponencial temprana, es necesario probar el portador de consumibles de reacción, la detección de diseño de la sonda de cebadores y el sistema de tampón de reacción. El período de amplificación exponencial es la reacción más directa de la actividad enzimática, y también es la prueba de la coordinación perfecta del equipo POCT, los portadores de reacción y los reactivos. En este momento, el control de la temperatura del equipo, la adquisición y el análisis de la señal óptica, la biocompatibilidad del portador y el rendimiento del sistema de los reactivos deben ajustarse y probarse en todos los aspectos. Finalmente, se completa toda la amplificación, y los resultados deben presentarse mediante un riguroso algoritmo de datos para obtener un valor de CT razonable.

Un pequeño paso en la optimización del valor de CT son los innumerables pasos del personal de I + D. En la ansiedad y la emoción del día y la noche, cada vez que "las montañas y los ríos no se ven por ningún lado, los sauces están oscuros y las flores son brillantes y hay otro pueblo", lo que nos da el coraje y la pasión de avanzar nuevamente.