«Новая программа диагностики и лечения коронарной вирусной пневмонии (испытательное девятое издание)» использует значение Ct обнаружения нуклеиновых кислот ≥35 в качестве одного из важных оснований для разрешения режима изоляции или выписки. Итак, что же представляет собой значение Ct набора для обнаружения нуклеиновых кислот? Сопоставимы ли значения Ct различных комплектов? Чем ниже значение Ct, тем лучше производительность комплекта?
Значение Ct (Threshold Cycle, Ct) — это количество циклов ПЦР, когда интенсивность количественного сигнала флуоресценции в реальном времени превышает установленный порог. В качестве примера наборов для обнаружения нуклеиновых кислот взята новая коронка. Для одной и той же реакции одного и того же набора для обнаружения двух образцов, содержащих вирус, A и B, размер значения Ct в определенной степени представляет собой количество копий вирусного гена, то есть вирусную нагрузку. Чем ниже Ct образца B, тем выше вирусная нагрузка. Значение Ct обратно пропорционально вирусной нагрузке и ее инфекционности. О плюсах и минусах различных наборов для количественного определения флуоресценции в реальном времени нельзя судить исключительно по величине значения Ct, поскольку значения Ct разных наборов несопоставимы. Оценка эффективности набора должна оцениваться с точки зрения чувствительности (минимальный предел обнаружения), специфичности, точности, стабильности и диагностического применения. У каждого производителя реагентов есть свои восемнадцать видов боевых искусств, и в их применении есть свои магические силы, поэтому я не буду здесь вдаваться в подробности.
Для обычных инструментов/систем количественного анализа ПЦР в реальном времени (QPCR) получение значений Ct и их широкое использование в приложениях для обнаружения патогенов знакомы каждому. С развитием отрасли и развитием технологий оборудование и реагенты для QPCR столкнулись с новыми возможностями и проблемами. Аналитический центр Yiou (Отчет об исследованиях китайской индустрии генетического тестирования за 2021 год: технологии) проанализировал, что большинство компаний в индустрии QPCR в моей стране сталкиваются с общими проблемами, связанными с технологиями. В ответ на эти проблемы решения в основном делятся на два типа: ускорение совершенствования технологий и внедрение новых технологий.
POCT для молекулярной диагностики QPCR является одним из направлений развития отрасли, а улучшение производительности является важным фактором ускорения применения технологии. Как оптимизировать значение Ct ключевого параметра отдельной реакции в исследованиях и разработках для оборудования POCT с производительностью QPCR по одному образцу? При том же оборудовании, той же реакционной системе и той же концентрации темплата теоретически, чем больше значение Ct отдельной реакции, тем ниже эффективность фермента в реакции.
В процессе повышения эффективности ферментативной реакции и оптимизации значения Ct сначала можно проанализировать типичную кривую количественной амплификации флуоресценции за 40 циклов ПЦР. Кривая амплификации на рисунке ниже разделена на фоновую фазу флуоресценции, фазу экспоненциальной амплификации, линейную фазу и фазу плато. Чтобы добиться более низкого фона флуоресценции, насколько это возможно, чтобы отличить его от значения флуоресценции ранней экспоненциальной амплификации, необходимо провести тестирование с использованием реакционного расходного носителя, скрининга конструкции праймера-зонда и реакционной буферной системы. Период экспоненциальной амплификации является наиболее прямой реакцией активности фермента, а также доказательством идеальной координации оборудования ПОКТ, носителей реакции и реагентов. В настоящее время контроль температуры оборудования, сбор и анализ оптических сигналов, биосовместимость носителей и производительность системы реагентов должны быть отрегулированы и проверены во всех аспектах. Наконец, вся амплификация завершена, и результаты должны быть представлены с помощью строгого алгоритма обработки данных, чтобы получить разумное значение Ct.

Небольшим шагом в оптимизации значения Ct являются бесчисленные шаги специалистов по исследованиям и разработкам. В тревоге и волнении дня и ночи, каждый раз «гор и рек не видно, ивы темны, цветы яркие и есть еще одна деревня», что дает нам смелость и страсть двигаться вперед. снова.