'신종 코로나바이러스 폐렴 진단 및 치료 프로그램(시험판 9판)'은 핵산 검출 Ct 값 ≥35를 격리 관리 해제 또는 퇴원의 중요한 기준 중 하나로 활용한다. 그렇다면 핵산검출키트의 Ct값은 무엇을 의미할까요? 서로 다른 키트의 Ct 값을 비교할 수 있습니까? Ct 값이 낮을수록 키트 성능이 좋아지나요?
Ct 값(Threshold Cycle, Ct)은 실시간 형광 정량형광 신호의 세기가 설정된 임계값을 초과할 때의 PCR 사이클 수입니다. 핵산 검출 키트는 새로운 크라운을 예로 듭니다. 두 개의 바이러스 함유 샘플 A와 B를 검출하기 위한 동일한 키트의 동일한 반응에서 Ct 값의 크기는 어느 정도 바이러스 유전자의 복사본 수, 즉 바이러스 로드를 나타냅니다. 샘플 B의 Ct가 낮을수록 바이러스 수치가 높아집니다. Ct 값은 바이러스 양과 감염성에 반비례합니다. 서로 다른 실시간 형광 정량 키트의 장단점은 서로 다른 키트의 Ct 값을 비교할 수 없기 때문에 Ct 값의 크기만으로는 판단할 수 없습니다. 키트의 성능평가는 민감도(최소검출한계), 특이도, 정밀도, 안정성, 진단적용 등의 측면에서 측정되어야 한다. 각 시약 제조사마다 18종의 무술이 있고, 응용하는 데에도 고유한 마법의 힘이 있으므로 여기서는 자세히 설명하지 않겠습니다.
기존의 실시간 정량적 PCR(QPCR) 분석 장비/시스템의 경우 Ct 값의 획득과 병원체 탐지 응용 분야에서의 광범위한 사용은 모든 사람에게 익숙합니다. 산업 발전과 기술 발전으로 인해 QPCR 장비와 시약은 기회와 도전에 직면해 있습니다. Yiou Think Tank(2021년 중국 유전자 검사 산업에 관한 연구 보고서: 기술)는 우리나라 QPCR 산업의 대부분 기업이 기술을 기반으로 공통적인 문제에 직면하고 있다고 분석했습니다. 이러한 문제에 대한 솔루션은 크게 기술 개선 가속화와 신기술 배포의 두 가지 유형으로 나뉩니다.
QPCR 분자진단을 위한 POCT는 업계 발전 방향 중 하나이며, 성능 향상은 기술 적용을 가속화하는 중요한 요소이다. 단일 샘플 처리량이 QPCR인 POCT 장비의 경우 R&D에서 단일 반응의 핵심 매개변수인 Ct 값을 최적화하는 방법은 무엇입니까? 동일한 장비, 동일한 반응 시스템 및 동일한 템플릿 농도에서는 이론적으로 단일 반응의 Ct 값이 클수록 반응에서 효소의 효율이 낮아집니다.
효소반응의 효율을 향상시키고 Ct 값을 최적화하는 과정에서 일반적인 40 PCR 사이클의 형광 정량 증폭 곡선을 먼저 분석할 수 있습니다. 아래 그림의 증폭 곡선은 형광 배경 단계, 지수 증폭 단계, 선형 단계 및 고원 단계로 구분됩니다. 낮은 형광 배경을 달성하기 위해서는 가능한 한 초기 지수 증폭의 형광 값과 구별하기 위해 반응 소모품 캐리어, 프라이머 프로브 디자인 스크리닝 및 반응 완충 시스템에서 테스트가 필요합니다. 지수 증폭 기간은 효소 활성의 가장 직접적인 반응이며 POCT 장비, 반응 캐리어 및 시약의 완벽한 조화를 증명하기도 합니다. 이때 장비 온도 제어, 광신호 획득 및 분석, 캐리어 생체 적합성, 시약의 시스템 성능을 모든 측면에서 조정하고 테스트해야 합니다. 마지막으로 전체 증폭이 완료되며, 합리적인 Ct 값을 얻기 위해서는 엄격한 데이터 알고리즘을 통해 결과가 제시되어야 합니다.

Ct 값 최적화의 작은 단계는 R&D 인력의 수많은 단계입니다. 낮과 밤의 불안과 설렘 속에서 매번 “산강은 보이지 않고 버드나무는 검고 꽃은 밝으며 또 다른 마을이 있느니라”는 우리에게 앞으로 나아갈 용기와 열정을 줍니다. 다시.